Nós comparamos os resultados obtidos pela sorotipagem usando um painel de anticorpos monoclonais (mAb) ao qual se incluíam os mAbs 7 e 10, com os resultados obtidos pelo RFLP do gene rRNA (ribotipagem). O propósito deste estudo foi avaliar a correlação entre os métodos fenotípico e genotípico de tipagem de N. meningitidis. Os ribotipos obtidos usando as endonucleases de restrição ClaI e EcoRV foram hábeis em dividir as cepas em sete e dois diferentes perfis de restrição, respectivamente. A caracterização adicional de epítopos na proteína PorB melhorou a correlação entre os dois métodos de tipagem de N. meningitidis.

We compared the results obtained by serotyping of PorB epitopes using an expanded panel of monoclonal antibodies (mAb) including mAb 7 and mAb 10, with results obtained by RFLP of rRNA genes (ribotyping). The purpose of this study was to assess the correlation between phenotypic- and genotypic- methods for typing N. meningitidis. The ribotypes obtained using ClaI or EcoRV endonucleases grouped the strains in seven and two different patterns, respectively. This additional characterization of PorB epitopes improved the correlation between these two methods of typing N. meningitidis.

Foram estudadas 30 cepas de Listeria monocytogenes isoladas a partir de diferentes alimentos (16 diferentes tipos de linguiça, 14 de queijo), adquiridos em supermercados da cidade de São Paulo. As cepas foram classificadas através da ribotipagem e analisadas quanto à presença e expressão do gene da hemolisina e à produção da enzima fosfolipase C fosfatidilinositol-específica PI-PLC. As cepas de L. monocytogenes foram diferenciadas em 6 ribotipos. As cepas do tipo I possuiam o mesmo perfil da amostra padrão de L.monocytogenes (ATCC 15313), sendo 13 (43,3%) das cepas estudadas correspondentes a ele. A atividade hemolítica foi observada em 29 (96,7%) das cepas, quando incubadas a 37°C em agar sangue, mas não a 4°C. O método da hibridização direta de colônias, utilizando sonda para hemolisina, revelou resultado positivo para todas as cepas. A PI-PLC foi produzida por 90% das amostras analisadas. Deste modo, foi possível concluir que não há relação entre os seis ribotipos de L. monocytogenes identificados nesse estudo e os fatores de virulência estudados (hemolisina e PI-PLC).

A total of 30 strains of Listeria monocytogenes isolated from different foods (16 of differents kinds of sausage, 14 cheese,) purchased at groceries of São Paulo City were ribotyped and analysed for the presence and expression of hemolysin gene and production of phosphatidylinositol-specific phosphalipase C - PI-PLC enzyme. The L. monocytogenes strains were differentiated into six ribotype classes. A total of 13 (43.3%) from these strains belong to the same ribotype (ribotype I), and was coincident to the ribotype of the standard L. monocytogenes prototype strain (ATCC-15313). The hemolytic activity was observed in 29 (96.7%) strains when incubated at 37oC, but not at 4oC. The direct colony hybridization method for hemolysin gene detection showed a positive reaction whit all the 30 L. monocytogenes strains, while showed negative reaction with other Listeria spp. The PI-PLC was produced by 27 (90%) of the strains analysed. There was no correlation between the six identified ribotypes and the virulence factors (hemolysin and PI-PLC) studied.

No presente trabalho nós examinamos o uso potencial de sondas de oligonucleotídeos para caracterizar sorotipos de Neisseria meningitidis sem o uso de anticorpos mono-clonais (MAbs). A diversidade antigênica da proteína PorB forma a base do método de sorotipagem, todavia, o atual painel de MAbs utilizados, sub-estima em no mínimo 50% a diversidade desta proteína devido a falta de reagentes para as várias regiões variáveis (VRs) da proteína PorB ou porque várias variantes das VRs não são reagentes com os MAbs disponíveis. Nós analisamos o uso de sondas de oligonucleotídeos para caracterizar os sorotipos 10 e 19 de N. meningitidis. O gene porB da cepa protótipo do sorotipo 10 foi sequenciado e alinhado com outras 7 sequências de diferentes sorotipos, e as individuais VRs foram então analisadas. Os resultados com as sondas 21U (VR1-A) e 615U (VR3-B) contra 72 cepas de N. meningitidis confirmaram que VR1-A e VR3-B codificam epítopos para os MAbs 19 e 10 respectivamente. É possível o uso de sondas para a caracterização dos sorotipos e podemos tipar 100% da diversidade da VR do gene porB. Trata-se de um método simples, rápido, e especialmente útil para a análise de um grande número de amostras.

In the present study we examine the potential use of oligonucleotide probes to characterize Neisseria meningitidis serotypes without the use of monoclonal antibodies (MAbs). Antigenic diversity on PorB protein forms the bases of serotyping method. However, the current panel of MAbs underestimated, by at least 50% the PorB variability, presumably because reagents for several PorB variable regions (VRs) are lacking, or because a number of VR variants are not recognized by serotype-defining MAbs12. We analyzed the use of oligonucleotide probes to characterize serotype 10 and serotype 19 of N. meningitidis. The porB gene sequence for the prototype strain of serotype 10 was determined, aligned with 7 other porB sequences from different serotypes, and analysis of individual VRs were performed. The results of DNA probes 21U (VR1-A) and 615U (VR3-B) used against 72 N. meningitidis strains confirm that VR1 type A and VR3 type B encode epitopes for serotype-defined MAbs 19 and 10, respectively. The use of probes for characterizing serotypes possible can type 100% of the PorB VR diversity. It is a simple and rapid method specially useful for analysis of large number of samples.

Epidemia de doença meningocócica por sorogrupo B tem ocorrido na Grande São Paulo desde 1988. Uma vacina cubana, baseada em proteína de membrana externa de uma cepa de Neisseria meningitidis sorogrupo B: sorotipo 4: sorosubtipo P1.15 (B:4:P1.15), foi administrada em cerca de 2.4 milhões de crianças entre 3 meses a 6 anos de idade durante 1989 e 1990. A administração da vacina teve pouco ou nenhum efeito na evolução da epidemia. Para detectar mudança clonal que poderia explicar o contínuo aumento da doença depois da vacinação, foram sorotipadas 834 cepas isoladas entre 1990 e 1996 de pacientes com doença sistêmica. Cepas B:4:P1.15 isoladas desde 1977, têm sido o fenótipo mais prevalente desde 1988. Essas cepas ainda são prevalentes na região e foram responsáveis por cerca de 68% dos 834 casos por sorogrupo B nos últimos 7 anos. Foram analisados 438 (52%) dessas cepas por RFLP do rRNA gene (ribotipagem), e o perfil mais frequente foi o Rbl (68%). Concluímos que o clone B:4:P1.15 - Rbl foi o mais prevalente e responsável pelo contínuo aumento da doença meningocócica na Grande São Paulo durante os últimos 7 anos apesar da campanha de vacinação.

A large epidemic of serogroup B meningococcal disease (MD), has been occurring in greater São Paulo, Brazil, since 1988.21 A Cuban-produced vaccine, based on outer-membrane-protein (OMP) from serogroup B: serotype 4: serosubtype P1.15 (B:4:P1.15) Neisseria meningitidis, was given to about 2.4 million children aged from 3 months to 6 years during 1989 and 1990. The administration of vaccine had little or no measurable effects on this outbreak. In order to detect clonal changes that could explain the continued increase in the incidence of disease after the vaccination, we serotyped isolates recovered between 1990 and 1996 from 834 patients with systemic disease. Strains B:4:P1.15, which was detected in the area as early as 1977, has been the most prevalent phenotype since 1988. These strains are still prevalent in the area and were responsible for about 68% of 834 serogroup B cases in the last 7 years. We analyzed 438 (52%) of these strains by restriction fragment length polymorphism (RFLPs) of rRNA genes (ribotyping). The most frequent pattern obtained was referred to as Rb1 (68%). We concluded that the same clone of B:4:P1.15-Rb1 strains was the most prevalent strain and responsible for the continued increase of incidence of serogroup B MD cases in greater São Paulo during the last 7 years in spite of the vaccination trial.